以上试剂及其它药剂、仪器可在各省市化学试剂商店、医疗器械商店购买。

二、Ｃu、Ｚu-SOD的提取及纯化(牛、马血为例)

１、工业流程：

加抗凝剂 盐洗

鲜牛血--------------------->红血球------------------------>

离心除黄色血浆 加ＮaＣＬ

热变性１ 热变性２

压积红细胞-------------->淡黄色混合液--------------------->

68度30分钟 60-65度20分钟

加丙酮 加丙酮 层析

浅蓝色清液----------->絮状沉淀-------------->沉淀------------>

冻干

透析除盐

洗脱----------------->透析液--------->SOD(冻干品)

２、提取方法

(１)收集红细胞：鲜牛血１００升，加入３. ８％柠檬酸三钠抗凝剂搅拌均匀，静置，使红细胞自然沉降，除去上层大部分血浆，下层液再离心除尽其余血浆，再加入３倍量０.９％氯化钠(精制食盐)洗涤两次， 离心可收集到压积红细胞(４０升)。

(２)热变性１：收集的红细胞再加入４公斤氯化钠，４０克氯化铜，蒸馏水１００升搅匀，水浴加热到６８度恒温３０分钟，迅速冷却加至室温，过滤除沉淀，收集滤液。

(３)热变性２：滤液在６５度恒温水浴下，向滤液中慢慢中入４０克氯化铜，至滤液清澈变为淡蓝色为止，保温２０分钟，迅速冷却至室温，离心去沉淀得上清液。

(４)SOD粗品：超滤心清液加入０.７５倍全积的丙酮沉淀， 离心收集沉淀于离于水，离心除去不溶物得清液，清液加入０.７５倍体积的丙酮沉淀， 离心收集沉淀，沉淀经无水丙酮洗涤脱水两次，真空干燥得淡蓝色粉末状SOD粗品

(５)SOD粗品提纯：SOD粗品溶于２.５mmol/L，ＰＨ值７.６磷酸钾缓冲液，将该混合液上在７.５＊３０cm的层柱上，离子换剂为ＤＥＡＥ-ＳphadexＡ-５０(该柱事先用缓冲平衡)，以１００～２００ml/小时速度上样，完毕后用同一缓冲Ａ２８０mm值，低于０.０２然后用２５～２００mmol/L，ＰＨ值７.６磷酸钾缓冲液进行直线梯度分段洗脱，流速为１００ml/小时。用部分收集器收集， 洗脱液经透析除盐后，得浓缩的透析液，经冷冻干燥，得SOD成品，(呈浅绿色)。

三、SOD活性测定：

SOD的测定方法很多，常见的有化学法，免疫法等电点聚焦法等，化学法测定的原理主要是利用有些化合物如邻苯三酚，在自氧化过程中会产生有色中间物降超氧游离基(Ｏ２)这样就可以利用SOD分例(Ｏ２)。阻止中间物的积累而测定其酶活性。

１、试剂及仪器

(１)邻苯本酚分析纯，用１０mmol/LECL配成５０mmol/L溶液。

(２)ＵＶ－７５４紫外分光光度计。

２、测定方法： 
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