(１)邻苯三酚自氧化速度的测定。

在２５度、４５ml`５０mmol/L、ＰＨ值８.３、Ｋ２ＨＰＯ４－ＫＨ２ＰＯ４缓冲液中加入１０mmol/L的邻苯三酚，迅速摇匀，倒入光径１cm的比色杯内，在３２５mm波长下每隔３０秒测Ａ值一次，要求自氧化速度控制在０.０７００d/mm 左右。

(２)SOD或粗酶抽提液活性测定：

测定方法同测邻苯三酚自氧化速度，在加入邻苯三酚前加入待测SOD样液，测得数据按以下公式计算酶活性。

０.０７００－Ａ３２５mm/min

----------------------------------------＊１００％度

０.７０

样液稀释倍数 样液稀释倍数

酶活性(u/m1)＝------------＊反应液总体积＊----------------

５０％ 样液体积

 
３、蛋白浓度(mg/ml)和蛋白的计算：

SOD或粗酶抽提液，经２８０mm紫外比色测定后，查牛轿清白蛋的标准曲线，由此算出每ml含ug蛋白的量。

蛋白浓度＝ug蛋白/ml＊样液稀释倍数＊１０负３次方＝mg蛋白/ml总蛋白＝mg蛋白/ml＊原液总体积＝mg蛋白。

４、比活(u/mg蛋白)的计算：

单位活力(u/ml) 总活力

比活＝-----------------------＝-----------------＝u/mg蛋白

蛋白的浓度(mg蛋白/ml) 总蛋白

四、Ｃu、Ｚn－SOD性质：

１、Ｃu、Ｚ n－SOD呈蓝绿色，分子量在３２００左右，由两个中一个Ｃu和一个Ｚn。

２、对热稳定，天然牛血SOD，７５度下加热数分钟其酶活丧失很小。

３、ＰＨ值对SOD的影响，SOD在ＰＨ５.３～１０.５范围内，其催化速度不受影响，ＰＨ３.６时SODＺn脱落９５％，ＰＨ１２SOD构象发生不可递的构象，导致酶活性丧失。

４、SOD的紫外线吸收特征：SOD在２８０mm处没有吸收高峰。

５、金属辅其与酶活性。SOD属金属酶Ｚn仅于分子结构有关，而Ｃu与催化活性有关。

６、SOD是其具有还有和失活作用的。
（阅读次数： ）